依克那肽（Exenatide）是一个包含39个氨基酸残基的肽（分子量为4186.6 Da），已被批准用于治疗1型和2型糖尿病。该肽可以增强胰腺细胞的葡萄糖依赖性胰岛素的分泌，从而调控葡萄糖的代谢。在过去的几年里，血浆中依克那肽的定量分析通常是用配体-结合法来完成的。例如，药物动力学研究中，常用酶免疫分析法定量依克那肽，但当基质中含有与待测物具有类似物理化学性质的干扰物时，该方法有时存在选择性不够的问题。QTRAP 5500 质谱系统MRM³定量技术可保证人血浆中依克那肽测定的高选择性。

实验方法：

样品配置：依克那肽从血浆中提出，提取液用氮气挥干，复溶。在所有的制备步骤中，溶液的pH值和有机相浓度须精准控制。

液相色谱：Shimadzu UFLC LC-20ACXR；反相色谱柱C-18 2.0×30 mm, 5μm；流速 0.6 ml/min；流动相A 为0.1% 甲酸水溶液；流动相B为0.1% 甲酸甲醇溶液；梯度洗脱，5min内，流动相B从2%增至95%；进样量5μl。

质谱：使用AB SCIEX QTRAP 5500质谱系统，MRM³扫描方式。在MRM³扫描中，离子阱填充时间设定为动态填充时间（DFT），扫描速度10000Da/Sec，离子阱激发时间为25ms,每个质谱扫描循环时长0.17s。MRM3扫描的三级离子为838-396-202。

方法建立：

在增强一级质谱全扫描（EMS）模式下，依克那肽产生带5个正电荷的离子，m/z838.3，该离子被选作母离子。该离子在增强子离子（EPI）扫描模式下碎裂，产生的主要子离子为m/z396.4。该一级子离子在线性离子阱中发生碎裂，产生MS3谱图，其主要子离子为m/z202.2,上述三个离子被用来构建LC-MS MRM³定量方法。

结果与讨论：

使用LC-MS MRM³分析血浆提取物中的依克那肽可以明显地提高选择性。通过给出的MRM³分析和传统MRM分析所获得色谱图的比较，可以看出，MRM³色谱图中基线较低，且没有MRM色谱图中的干扰峰。QTRAP 5500的扫描速度（10000Da/Sec）保证了有足够的数据来获得离子色谱峰，从而使得定量具有良好的重现性和准确度。